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一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2- 10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例） 。 由于標準品濃度非常高 ，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行 ，千萬不能  污染樣品或本試劑盒的其他成分） 。為增加產品穩定性和避免擴散傳ran  xing病原 ， 本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳ran性的 DNA 片段作為陽性對照。

        1.   標記 6 個離心管 ，分別為 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
        2.    用帶芯槍頭分別加入 45  μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液 ，用帶芯槍頭，

下同） 。
3.   在 7 號管中加入 5  μL 1×10E8 拷貝/μL  的陽性對照(試劑盒提供)，充分震

      蕩 1 分鐘 ，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品 。放冰上待用。

          4.   換槍頭 ，在 6 號管中加入 5  μL 1×10E7 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，
                得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
          5.   換槍頭 ，在 5 號管中加入 5  μL 1×10E6 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，
                得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

          6.   重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品 。放冰上待用。二、樣品 DNA 的制備
          7.   如果有 N 個樣品，設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性
                對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 10000
                倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣 ，以此作為PC 。另外用水作為 NC。
          8.   用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數 DNA 提取試劑盒兼容 。
                本產品的裂解液可以直接作為 PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。

四、數據處理

      12. 如果把本試劑盒用于定量檢測 ，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸 ， 以 Ct 值為縱軸 ，繪制標準曲線 。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品

RNA 濃度的 log 值 ，再推算出其濃度。

      13. 如果把本試劑盒用于定性檢測 ，只判斷陽性或陰性 ，則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40 。陽性對照  必須有熒光對數增長 ，有典型擴增曲線 ，Ct 值應該 小于或等于 30 。對待測樣品 ，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性 ，如果小 于或等于 35 則為陽性 。如果在 35-40 之間 ，則重復一次 。重復實驗的 Ct

值如果大于或等于 40 則為陰性 ，如果小于 40 ，則為陽性。